Kompleti PCR në kohë reale për virusin Monkeypox
Detajet e produktit
Përdorimi i caktuar
Përdoret për zbulimin e virusit të lisë së majmunit në serumin e njeriut ose mostrat e eksudatit të lezionit duke përdorur sisteme PCR në kohë reale.
Parimi i Testit
Ky produkt është një sistem testimi PCR në kohë reale Taqman® i bazuar në sonda fluoreshente.Abetare dhe sonda specifike janë krijuar për zbulimin e gjenit F3L të virusit të lisë së majmunit.Kontrolli i brendshëm që synon gjenin e konservuar njerëzor monitoron mbledhjen e mostrës, trajtimin e mostrës dhe procesin e PCR në kohë reale për të shmangur rezultatet false-negative.Kompleti është një sistem i liofilizuar plotësisht parapërzierës, i cili përfshin materialet e nevojshme për zbulimin e virusit të lisë së majmunit: enzimën e amplifikimit të acidit nukleik, enzimën UDG, tampon reaksioni, primer specifik dhe sondë.
Përmbajtja kryesore
Komponentët e dhënë janë renditur në tabelë.
| Komponentët | Paketa | Përbërës |
| Virusi i lisë së majmunitPremiks i liofilizuar | 8 tuba PCR me shirita× 6 qese | Primerë, sonda, përzierje dNTP/dUTP, Mg2+, Taq ADN polimeraza, Enzima UDG |
| Kontroll pozitiv MPV | 400 μL×1 tub | Sekuencat e ADN-së që përmbajnë gjenin Target |
| Kontroll negativ MPV | 400 μL×1 tub | Sekuencat e ADN-së që përmbajnë segment të gjenit të njeriut |
| Tretësirë shpërbërëse | 1 mL×1 tub | Stabilizues |
| Certifikata e Konformitetit | 1 copë | / |
Fluksi i Operacionit
1. MostraKoleksioni:Mostra duhet të mblidhet në tuba sterile në përputhje me rrethanat
me specifikime teknike standarde.
2. Përgatitja e reagentit (Zona e përgatitjes së reagentit)
Hiqni përbërësit e kompletit, balanconi ato në temperaturën e dhomës për përdorim në gatishmëri.
3. Përpunimi i mostrës (Zona e përpunimit të mostrës)
3.1 Nxjerrja e acidit nukleik
Rekomandohet marrja e mostrave të lëngshme 200μL, Kontrolli Pozitiv dhe Kontrolli Negativ për nxjerrjen e acidit nukleik, sipas kërkesave dhe procedurave përkatëse të kompleteve të nxjerrjes së ADN-së virale.
3.2 Shpërndarja e pluhurit të liofilizuar dhe shtimi i shabllonit
Përgatitni premiksin e liofilizuar të virusit të lisë së majmunit sipas numrit të mostrave.Një kampion ka nevojë për një tub PCR që përmban pluhur premiks të liofilizuar.Kontrolli negativ dhe kontrolli pozitiv duhet të trajtohen si dy mostra.
(1) Shtoni 15 μL tretësirë tretëse në çdo tub PCR që përmban parapërzierje të liofilizuar, më pas shtoni përkatësisht 5 μL mostra të nxjerra/Kontroll negativ/Kontroll pozitiv në çdo tub PCR.
(2) Mbuloni fort tubat PCR, lëvizni tubat PCR me dorë derisa pluhuri i liofilizuar të tretet dhe të përzihet plotësisht, mblidhni lëngun në fund të tubave PCR me centrifugim të menjëhershëm me shpejtësi të ulët.
(3) Nëse përdorni instrument të zakonshëm PCR në kohë reale për zbulim, atëherë transferoni drejtpërdrejt tubat PCR në zonën e amplifikimit;nëse përdorni BTK-8 për zbulim, atëherë duhet të kryeni veprimet e mëposhtme: transferoni 10 μL lëng nga tubi PCR në pusin e çipit të reagimit të BTK-8.Një tub PCR korrespondon me një pus në çip.Gjatë funksionimit të pipetimit, sigurohuni që pipeta të jetë 90 gradë vertikale.Majat e pipetës së pengesës së aerosolit duhet të vendosen në qendër të pusit me forcë të moderuar dhe të ndalojnë shtyrjen e pipetës kur të arrijë shpejtësinë e parë (për të shmangur flluska).Pasi të mbushen puset, nxirreni një membranë çipi reaksioni për të mbuluar të gjitha puset dhe çipi më pas transferohet në zonën e zbulimit të amplifikimit.
4. Përforcimi PCR (Zona e zbulimit)
4.1 Vendosni tubat PCR/çipin e reagimit në rezervuarin e reaksionit dhe vendosni emrat e çdo pusi reaksioni në rendin përkatës.
4.2 Cilësimet e fluoreshencës së zbulimit: (1) Virusi i lisë së majmunit (FAM);(2) Kontrolli i Brendshëm (CY5).
4.3 Drejtoni protokollin e mëposhtëm të çiklizmit
Protokolli i ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:
| Hapat | Temperatura | Koha | Ciklet | |
| 1 | Para-denatyrimi | 95 ℃ | 2 min | 1 |
| 2 | Denatyrimi | 95 ℃ | 10 s | 45 |
| Pjekja, zgjerimi, marrja e fluoreshencës | 60 ℃ | 30 s | ||
Protokolli i BTK-8:
| Hapat | Temperatura | Koha | Ciklet | |
| 1 | Para-denatyrimi | 95 ℃ | 2 min | 1 |
| 2 | Denatyrimi | 95 ℃ | 5 s | 45 |
| Pjekja, zgjerimi, marrja e fluoreshencës | 60 ℃ | 14 s | ||
5. Analiza e rezultateve (ju lutemi referojuni Manualit të Përdoruesit të Instrumentit)
Pas reagimit, rezultatet do të ruhen automatikisht.Klikoni "Analize" për të analizuar dhe instrumenti do të interpretojë automatikisht vlerat Ct të çdo kampioni në kolonën e rezultateve.Rezultatet negative dhe pozitive të kontrollit duhet të jenë në përputhje me "6. Kontrolli i cilësisë".
6. Kontrolli i cilësisë
6.1 Kontrolli negativ: Nuk ka Ct ose Ct>40 në kanalin FAM, Ct≤40 në kanalin CY5 me kurbën e amplifikimit normal.
6.2 Kontrolli pozitiv: Ct≤35 në kanalin FAM me kurbën e amplifikimit normal, Ct≤40 në kanalin CY5 me kurbën normale të amplifikimit.
6.3 Rezultati është i vlefshëm nëse plotësohen të gjitha kriteret e mësipërme.Përndryshe, rezultati është i pavlefshëm.
Interpretimi i rezultatit
Rezultatet e mëposhtme janë të mundshme:
| Vlera Ct e kanalit FAM | Vlera Ct e kanalit CY5 | Interpretimi | |
| 1# | Pa Ct ose Ct>40 | ≤40 | Virusi i lisë së majmunit negativ |
| 2# | ≤40 | Çdo rezultat | Virusi i lisë së majmunit pozitiv |
| 3# | 40-45 | ≤40 | Ri-testim;nëse është ende 40~45, raporto si 1# |
| 4# | Pa Ct ose Ct>40 | Pa Ct ose Ct>40 | E pavlefshme |
SHËNIM: Nëse rezulton një rezultat i pavlefshëm, mostra duhet të mblidhet dhe të testohet përsëri.
Informacioni i porosisë
| Emri i produktit | Mace.Nr | Madhësia | Mostra | Jetëgjatësia | Trans.& Sto.Temp. |
| Kompleti PCR në kohë reale për virusin Monkeypox | B001P-01 | 48 teste/kit | Serum/Eksudat i lezionit | 12 muaj | -25-15℃ |
